Assise, cité médiévale bâtie sur une colline, est le lieu de naissance de saint François, étroitement associé à l'œuvre de l'Ordre franciscain. Ses chefs-d'œuvre de l'art médiéval, tels que la basilique Saint-François et les peintures de Cimabue et de Giotto, ont fait d'Assise une référence fondamentale pour le développement de l'art et de l'architecture italiens et européens. Après la mort de saint François et de sainte Claire, des églises furent construites en leur honneur. L'église Saint-François, appelée basilique Saint-François d'Assise, est célèbre pour avoir été le lieu de sa sépulture. Elle est également célèbre pour ses fresques ornant ses murs et ses plafonds. De nombreux visiteurs se rendent à Assise en pèlerinage. Assise a été inscrite au patrimoine mondial de l'UNESCO en 2000.

Cascia abrite sainte Rita de Cascia, l'une des saintes les plus vénérées du catholicisme, souvent surnommée la « sainte de l'impossible ». Cascia est également le lieu où est conservé un miracle eucharistique, ce qui en fait une destination privilégiée pour de nombreux pèlerins catholiques. Sainte Rita de Cascia est souvent appelée « la sainte de l'impossible ». L'histoire de sainte Rita témoigne du pouvoir de la prière et de la foi. Née en 1381 près de Cascia, elle souhaitait entrer au couvent, mais se maria à l'âge de 16 ans, obéissant à ses désirs. On a longtemps pensé que son mari l'avait maltraitée pendant leurs 18 années de mariage. Très souvent, sainte Rita est dépeinte comme une épouse souffrante, voire maltraitée, dont le mari était un ivrogne violent et un conjoint infidèle.

La basilique Sainte-Claire d'Assise, réalisée en pierre rose typique extraite des carrières du mont Subasio, abrite de précieuses fresques datant de la période allant du XIIe au XIVe siècle. Dans la chapelle de droite, le long de l'unique nef de Sainte-Claire d'Assise, terminée par un transept et une abside polygonale, on peut admirer le Crucifix qui, selon la tradition, aurait invité saint François à l'église Saint-Damien pour « reconstruire l'Église ». Dans la crypte, sont conservés les restes de sainte Claire d'Assise et quelques reliques particulièrement bien conservées, parmi lesquelles un habit de saint François et un tissu réalisé par sainte Claire.

Acutis a étudié plus de 136 miracles eucharistiques survenus au fil des siècles dans différents pays du monde, reconnus par l'Église, et les a rassemblés dans un musée virtuel. Outre la création d'un site web pour héberger ce musée virtuel, il a contribué à la création de conférences qui ont fait le tour du monde. C'est la première étape sur le chemin de la sainteté. Le 5 juillet 2018, sa cause a progressé et il a été nommé Vénérable Carlo Acutis. Le 22 février 2020, le Vatican a annoncé l'approbation d'un miracle attribué à son intercession.

La Portioncule est une petite église catholique située dans la basilique papale Sainte-Marie-des-Anges d'Assise. C'est là que le mouvement franciscain est né. La chapelle était située sur un petit terrain (« Portioncule ») appartenant à l'ordre de Saint-Benoît du Mont Subasio. Plus tard, le nom du terrain fut attribué à la petite église elle-même. Elle était en mauvais état, abandonnée dans un bois de chênes. Après un pèlerinage à Rome, où il mendia aux portes de l'église pour les pauvres, François raconta avoir eu une vision mystique de Jésus-Christ dans la chapelle Saint-Damien, au bord du chemin. L'icône du Christ Crucifié s'y était animée et lui avait dit trois fois : « François, François, va réparer ma maison qui, comme tu le vois, tombe en ruine. » Il restaura plusieurs églises en ruines, dont la Portioncule, petite chapelle Sainte-Marie-des-Anges, située à la sortie de la ville.